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293T人胚肾细胞起死回生之心得 学会你在培养中将少走很多弯路

  • 分类:知识学堂
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  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2022-01-24 11:16
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【概要描述】当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落

293T人胚肾细胞起死回生之心得 学会你在培养中将少走很多弯路

【概要描述】当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落

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  293T细胞起死回生之方法,详细讲解一下要点,分享一点心得,希望有用的上的少走一些弯路。
  细胞传代:
  当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落。
  细胞消化:
  将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混匀,不能吹打,分装2瓶,如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁,取出加入10ml培养基轻微吸打混匀,分装2瓶。
  培养基:
  MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+双抗

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