

【概要描述】大黄素可能通过抑制 NF-B信号通路的活化抑制HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和炎症反应。
【概要描述】大黄素可能通过抑制 NF-B信号通路的活化抑制HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和炎症反应。
目的
探讨大黄素对TNF-α诱导的HFLS-RA人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响。方法 将人类风湿关节炎成纤维样滑膜 HFLSRA 细胞随机分为对照组(未处理)、诱导组(TNF-α处理)、25 μmol/L 大黄素组(TNF-α和大黄素处理)、50 μmol/L大黄素组(TNF-α和大黄素处理)和100 μmol/L大黄素组(TNF-α和大黄素处理)。采用 MTT法和克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆形成率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR 检测凋亡相关基因 Bcl-2 和 Bax mRNA的表达,ELISA 检测细胞上清液中IL-6和IL-β 水平,Western blot 检测细胞中 NF-B信号通路相关蛋白 p-HkBα和 p-NF水B p65的表达。
结果
1.大黄素对 HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响 MT检测结果显示,与对照组比较,诱导组细胞的存活率升高(P<0.05);与诱导组比较,25、50、100 wmol/L 大黄素处理组细胞的存活率下降(P<0.05)。同时,克隆形成实验结果显示,诱导组细胞的克隆形成率较对照组升高(P<0.05);而给予25、50、100 μmol/L大黄素处理后,HFLS-RA细胞的克隆形成率较诱导组均降低(P<0.05)。随着大黄素浓度的增加,HFLS-RA细胞的存活率和克隆形成率越低。见表1。
2.大黄素对HFIS-RA 细胞凋亡的影响 流式细胞仪(图 2)检测对照组、诱导组、25 μmol/L 大黄素组、50 μmol/L大黄素组和 100 μmol/L大黄素组细胞的凋亡率存在差异(P<0.05),与对照组比较,诱导组细胞的凋亡率降低(P<0.05);与诱导组比较,25、50、100 μmol/L 大黄素组细胞的凋亡率均升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结果见图1、表1。
3.大黄素对HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡相关基因表达的影响RTPCR 检测结果显示,诱导组细胞中 Bcl-2 mRNA 的表达水平高于对照组(P<0.05),而 Bax mRNA 表达低于对照组(P<0.05);随25、50、100 μmol/L大黄素浓度的升高,HFLS-RA 细胞中 Bcl-2 mRNA逐渐降低,而Bax mRNA表达逐渐升高,与诱导组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。
3.4 大黄素对HFLS-RA细胞上清液中I-6和I-1β水平的影响 与对照组比较,诱导组中 IL-6和Ⅱ-1β 水平升高((P<0.05);而大黄素组较诱导组降低(P<0.05),且大黄素浓度越高降低幅度越明显。见表3。
5.大黄素对HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中 NF-B信号通路的影响与对照组比较,诱导组细胞中 p-kBα 和 p-NF-B p65蛋白的表达升高(P<0.05);与诱导组比较,25、50、100 μmol/L大黄素组细胞中 p-kBα和 p-NF+B p65 蛋白的表达下降(P<0.05),且呈浓度依赖性。见图2、表4。
结论
大黄素可能通过抑制 NF-B信号通路的活化抑制HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和炎症反应。
关键词∶大黄素;类风湿性关节炎;HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞;炎性因子;NF-B信号通路
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