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两种复合模型符合乙肝肝纤维化模型需求 其差异主要集中于病毒学指标以及病理改变

  • 分类:学术讲座
  • 作者:专业SCI润色实验外包、整体课题外包服务,你值得信赖的合作伙伴--吉妮欧
  • 来源:专业提供(ATCC细胞及其它库源细胞、动物实验外包、CRO服务、SCI润色整体课题外包)
  • 发布时间:2022-03-25 10:48
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【概要描述】乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种嗜肝性 DNA病毒,可导致慢性肝炎、肝硬化与肝癌t1-2。建立稳定的 HBV 诱导的慢性肝炎肝纤维化动物模型对于乙肝肝纤维化病理机制及其药物评价具有重要意义

两种复合模型符合乙肝肝纤维化模型需求 其差异主要集中于病毒学指标以及病理改变

【概要描述】乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种嗜肝性 DNA病毒,可导致慢性肝炎、肝硬化与肝癌t1-2。建立稳定的 HBV 诱导的慢性肝炎肝纤维化动物模型对于乙肝肝纤维化病理机制及其药物评价具有重要意义

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  两种乙肝肝纤维化小鼠复合模型的比较
  乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种嗜肝性 DNA病毒,可导致慢性肝炎、肝硬化与肝癌t1-2。建立稳定的 HBV 诱导的慢性肝炎肝纤维化动物模型对于乙肝肝纤维化病理机制及其药物评价具有重要意义。本研究采用C57BL/6 NTg (1.28HBV)/Vst 乙肝病毒转基因(HBV-Tg)与rAAV84.3HBV腺相关病毒转染(rAAV)小鼠,联合CCl。腹腔注射,诱导慢性乙肝肝纤维化发生。观察比较两种模型的病毒学及纤维化病理特点,为研究时选择相关动物模型提供依据。
  目的
  采用 C57BL/6 N-Tg(1.28HBV)/Vst 型乙肝病毒转基因小鼠与rAAV8-1.3HBV 腺相关病毒转染小鼠联合CCl腹腔注射诱导乙肝肝纤维化小鼠模型,比较两种小鼠模型的病毒学及生化病理特点。方法实验分野生型对照组(WT)、rAAV8-.3HBV 转染组(rAAV)、CCl,组(CCl)、rAAV8-.3HBV 复合 CCL,模型组(rAAV+CCl),C57BL/6 N-Tg(1.28HBV)/Vst 乙肝病毒转基因组(Tg)、转基因复合 CCl,组(Tg+CCl。),共计造模12周。ELISA试剂盒测定血清 HBsAg、HBeAg水平,荧光定量PCR法检测血清 HBV-DNA 载量,肝组织石蜡切片免疫组化染色观察肝内 HBsAg 及HBcAg 的表达,生化试剂盒测定血清 ALT、AST、AKP,盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量。HE 染色及天狼星红染色观察炎症与胶原等病理变化。
  结果
  1.两种复合模型小鼠血清病毒学指标比较

  结果显示∶除 WT组、CCl。组外,其余组血清HBsAg、HBeAg均为阳性,两种复合模型组相比,Tg+CCl4组血清HBsAg和HBeAg 水平高于rAAV+CCl。组(P< 0.01、P<0.05)(图1A、1B)。PCR结果显示,除WT组、CCl。组外,其余组别血清 HBV-DNA 载量均高于1.0×10'Ⅲ/mL,rAAV组与rAAV+CCl。组HBV-DNA载量高于 Tg 组与Tg+CCl。组(P<0.01、P<0.05)(图1C)。


  2.两种复合模型小鼠肝组织免疫组化染色指标比较
  肝组织石蜡切片免疫组化结果显示,WT 组、CCl。组均未见 HBsAg、HBcAg 阳性表达,其余组别小鼠肝组织中HBsAg 和 HBcAg 均可见不同程度阳性表达(图2A);通过图片半定量分析后发现,rAAV 组较 Tg 组 HBsAg 阳性表达面积明显减少(P<0.01),而rAAV组较Tg 组肝细胞核 HBcAg 阳性数量明显增多(P<0.01);两种复合模型组相比,HBsAg在肝组织中的表达未见明显差异(P>


  3.两种复合模型小鼠肝组织炎症与纤维化生化学指标的比较
  血清生化检测结果显示(表1),与WT组比较,CCl复合造模12周后,CCl组、Tg+CCl,组与rAAV +CCl。组血清 ALT与 AST水平均明显上升(P<0.01),Tg组与rAAV组对比 WT组没有明显变化(P> 0.05)。Tg组与rAAV组 ALT水平具有差异(P<0.01)。两种复合模型组相比;Tg+CCl,组与rAAV+CCl4组 ALT、AST水平均未见显著差异(P>0.05);各组AKP水平均未见明显差异(P>0.05)。肝组织Hyp 含量检测结果显示,与WT组比较,CCl。复合造模 12周后,CCl,组、Tg+CCl组与rAAV+CCl组肝组织中Hyp 含量均显著升高(P<0.01),两种复合模型组相比,Tg+CCl4组对比 rAAV+CCl。组肝内Hyp 含量具有明显差异(P<0.01)。


  4.两种复合模型小鼠肝组织炎症与纤维化病理特点的比较
  HE 染色结果显示,WT组小鼠肝小叶结构完整、清晰,肝细胞呈条索状排列整齐,在中央静脉周围呈放射状分布,Tg组与rAAV组肝小叶排列整齐,仅可观察到肝细胞核增大,其中rAAV 组存在少量炎细胞浸润,CCl。组、rAAV+CCl。组、Tg+CCl。组均出现大量肝实质细胞坏死,正常肝小叶结构消失,出现明显气球样变和脂肪变,汇管区大量炎性细胞浸润。天狼猩红染色结果显示,WT组肝组织未见明显胶原沉积,Tg组和rAAV组汇管区及小叶间出现少量胶原沉积,呈细线状,未见明显的桥接和假小叶,CCl组、rAAV+CCl组、Tg+CCl。组肝组织出现明显胶原纤维沉积,由汇管区向周围延伸,形成纤维间隔,其中Tg+CCl。组可见到明显的假小叶形成(图3A)。通过胶原半定量分析后发现;Tg+CCl 组胶原含量高于rAAV+CCl,组(P<0.01)(图3B)。


  结论
  两种复合模型符合乙肝肝纤维化模型需求,其差异主要集中于病毒学指标以及病理改变。rAAV+CCl组在 HBV-DNA 载量上具有优势,Tg+CCl组在纤维化进展更为明显。
  【关键词】动物模型;乙型肝炎病毒;炎症;肝纤维化;病理学

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