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高糖介导的人主动脉平滑肌纽胞(HASMCs)功能改变在动脉粥样硬化中的作用及分子机制

  • 分类:学术讲座
  • 作者:吉妮欧
  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2022-04-01 17:16
  • 访问量:

【概要描述】随着人们饮禽结构的改变和肥粹率的增加,糖尿病(diabetes,DM)的发病率日益端高。流行病学调查显示,糖尿病患者中动脉粥样硬化(mheroselerosis,AS〕的发生率和严重性选高于非糖尿病患者,而AS是冠心病等心血管疾病的主要病理基动,故深入研究精尿病加速AS 发生发展的具体机制,寻找有效的预防和治疗方法至关重要

高糖介导的人主动脉平滑肌纽胞(HASMCs)功能改变在动脉粥样硬化中的作用及分子机制

【概要描述】随着人们饮禽结构的改变和肥粹率的增加,糖尿病(diabetes,DM)的发病率日益端高。流行病学调查显示,糖尿病患者中动脉粥样硬化(mheroselerosis,AS〕的发生率和严重性选高于非糖尿病患者,而AS是冠心病等心血管疾病的主要病理基动,故深入研究精尿病加速AS 发生发展的具体机制,寻找有效的预防和治疗方法至关重要

  • 分类:学术讲座
  • 作者:吉妮欧
  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2022-04-01 17:16
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  研究背景
  随着人们饮禽结构的改变和肥粹率的增加,糖尿病(diabetes,DM)的发病率日益端高。流行病学调查显示,糖尿病患者中动脉粥样硬化(mheroselerosis,AS〕的发生率和严重性选高于非糖尿病患者,而AS是冠心病等心血管疾病的主要病理基动,故深入研究精尿病加速AS 发生发展的具体机制,寻找有效的预防和治疗方法至关重要。(推荐阅读:HCASMC人冠状动脉平滑肌细胞
  正常血管壁中的平滑肌妇图(vasculur smoothmescle cells,VSMCs)只存在于均脉中限中,以收缝型为主,其增殖速度很慢。糖尿病状态下,高糖、活性氧等刺激损伤直管内皮。内度细胞、炎性组教和血小极等释放大慧生长因子和趋化因予,使 VSMCs 从生长羽制中御以释放∶同时上述细胞还能分泌大量基质金属蛋白酵(matrlx eetllogcoteinae,MPs》,后者催化组家外基质(extracellular marix,ECM)降解,促使 VSMCs从中膜迁移至内膜,迁移到内腹层的VSMCs可分滞多种粘附分子和趋化因子。促使单核巨啉细胞浸税和泡沫烟粗约形或。区面。VSMCs 增殖和迁移是糖尿病 AS斑块形成的中心环节。
  组图周期作为增殖信号级联反应的题终途径。技各种有丝分裂刺激所共享。堆脓周期分为有丝分裂间期(G1 期、S期和 GZ期)和有丝分裂期(M期》,其中的各个检查点均有相应的报数周期蛋白(cyei)、润胞周期蛋白依粮性激酶(eyelin如opendent enes,CDK)及其为制剂(CDK inhibltot,cDK1)对其进行调控。直管损伤后,VSMCs响应有丝分裂原别藻从G1 期进入S期;其中oglinDI-GCDK4 和 cyeliE-CDK2 在这一特接期间按序发挥作用,是这一时期的细胞周期进穿所必需的,许多药剂,包括抗 VSMCs增殖剂,以及抗血栓和抗血小板剂。可以改变细腹周期中的一个或多个调节事件,导致纸数周期进程的阻断,从面抱制纽胞增殖。
  多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly(ADP-ibos)polymerase,PARP)-1是 PARP 家练最主要的亚型.发并了90%的PARP活性,PARP-1通过值化白身和其他染色质相关蛋白的多聚二磷酸腺苷核糖(poly(ADP-ibosyl》atiom,PARyktion)化来修复DNA,此外;PARP-1涉及多种组图功能,包括基因转录调控,须胞原期进展、长往。能量代侧和细略迁移,精尿病状态下,氧化应激、更硝假站等损伤DNA,PARP-1能够识别DNA 单链或双链损伤并枝激话。先前一系列研究已证实 PARP-1在糖尿病心机病,肾病,视网膜病及神经系统损害中的重要作用,然前其在燥展病加速1管内增生中的作用为未耀明。
  研究目的
  1.观察高模制激对人主动脉平滑从纽胞(HASMCs)中PARP-1表达的影响∶
  2.哥究PARP-1在高糖诱导的 HASMCs增殖和迁移中的作用;
  3.研究 PARP-1在镜尿病血管内腺增生中的作用。
  研究方法
  1.HASMCs的培养及分姐
  用含2%FBS的SMCM培养基对 HASMCs进行体外培养,置于s%CO2,37C 孵育箱。
  分组一∶根据高糖不同喇潍时间选行分组∶0小时、24小时、72小时、5天;分租二,正常对阻坦(NC,5.5 mM葡萄糖)、高渗对围组 (0c,5.5 mM荒药糖-275 mM甘露醇》、高糖利意跟(HG,33 mM葡药精)、高糖+PARP-1 抑制剂组(HG+PJ34。3mM葡萄糖-5回MPJ34>∶刻滋 72小时后收集细胞和培养基。
  2.HASMC 增殖检测
  用Cell-LirEdU 方法检测组愿的增殖情况。
  3.渣式迎屋术拾测
  收集于预后的组脚,稳化丙啶(propldiumiodide,PI)染色,利用液式细愿父检测集教而期的变化。
  4.HASMC。 迁移检测用Transwell 小室法构测纸家的迁移情况,
  5. 明咬酶谢检测
  用明胶酶盖法检测各组HASMC。上清浪中 MMP2和 MMP9约活性。
  6.蛋白质印漆法《wtem Rm)
  视取不同千预组HASMCs粉紧白,采用 Westem 围ot方检测PARP1、PAR、MMP2、MMP9及PCNA在蛋自水平的变化,以β-actin为内参照蛋白。
  7.实验动物模型构建和组识获取
  实验动物对象为C57BL%小限和C57BL6PARP-1基因敲除小鼠,均为8阀龄、增性、体重约25 g.将10只CS7BL6小蒙和10只CS7BL/PARP-1+小鼠腹腔注射链原佐剥素(septozotscin。STZ),剂量为5-gkg,另外 10只C9w作小以飘酸注射等法织的柠檬酸屋援冲液作为对州组。连续注射针s天。2 题后始测随机血精值,大于 16.7 mmol为1 型糖尿病造模成功,最终实验动特分沮如下;正管对围组,糖尿病CS7B16小属组、糖菜病 PARP-1小服近。遗模成功后,糖尿病和非糖尿病小鼠均行左侧颈总动脉结扎干术。术后3周取村。剥离整根主跳活包抵左侧硝总动警。放入5%名聚甲限中划使。液水准洗后进行石缝包埋和切片。
  8.人体直置姐识获取和分组
  与本隧移植中心合作,收集人体冠状动脑各分支。查看患者资料。排除悉性肿宿、急性炎控性疾病与风湿等氧统狭病患者的组织。临床直管标本获取后,迅迫放入49%多聚甲醛中,固定24小时后滤水冲洗过夜。初取左冠找动醚同旋支远段部分Smm段进行石的包坦称间片。是微像下观察,塑服庭管内费有于增生格组织分为正常组和增生组。
  9.组织形态及免疫组织染色
  对石短切片选行H&E到色,运围学疫组织化手验色法,粒测PARP-1.M0MP. MMP9 及增殖相胞核其原《proliferacing cell nuckear antign, PCNA)的表达水平,10.烧计学分析运用 SPSS v180软件进行数据分析。所有数据用均数生标准误 (MeansSEM)表示,采用Oneway ANOVA和Tuey post-hoc 方法进行分析,p值<0.05 时视为有统计学章义。
  研究结果
  1.高摘刺额促使 HASIMCs中 PARP-I 的表达增加
  用高糖(33mM,HG)刺激HASMCs,Wesem Blot 检测发残 PARP-1 蛋白表达量于72小时达高峰。
  2.高精潮意通过上调 PARP-1促进 HASMCz增殖
  CcLightEdU 检测结果发现,与NC 组和 OC 组相比,HG 刺激显著提高了HASMC3对EdU韵摄取率;在HG环境下,加入PARP-1 抑制剂PJ4别很大程度的减低了EdU 摄取率。流式细激剂渐检测发现,与NC 组和 OC 组相比,HG GL 期细胞数目明显减少面S期图数目明暴增加∶PJ4是著辩制了HG诱导的GI-S慧较换,Wsr Blot结果提示,相比于与NC组和0C组∶HG组中PARP-1 活性产物PAR和 GI-5期较换的重要标志物 PCNA表达均明显上升,P4可是著抑制HG 诱导豹 PAR、PCNA 表达的增加。以上说明 HG 刺激可酒通过上调PARP-1的表达和活性,促进细胞 G1-S期转换,进而促进HASMCs增殖。
  3.高糖刺数通汶上调PARP-1促进HASMGs迁移
  Trarswell 细胞迁移实验结果表明,与 NC 姐和 OC 组相比。HG 组 HASMCs 的迁移显著提高;HG+PJ34组相比于HG粗组胞迁移率明显降低。Western Bkoat 和明胶酶谱检测结果显示,相比于 NC 组和 OC∶组。HG 组 MMP2 和 MMP9表达和活性是著提高;在HG环境下,加入PJ4可品著抑制MIMPs的表达和活性。
  4.PARP-1促进糖尿病小藏在管内膜增生
  1E 曼色结果呈示。与正常对照迅相比,精尿病Cs70L6小某预动脉内照用墨增厚∶糖尿病 PARP-!小家殖动脉内落及度相比于摘息病C57AL活小家明是菲宁。
  免疫组化染色结果是示,与正常对阻坦相比,摘尿病 C57BL 小鼠颈动脉内膜明是增厚,其中 PARP-1、PCNA、MMP2和MIMP9的表达明显箱加∶相比于糖尿病 C57RL师 公鼠,糖探病 PARP-产小服烈动练内膜中 PCNA。MMPp 和MMP的表达明盟孩气,另务,我们用主动脉切片速行免烧组化警色,结要与硬动泳切片一致。
  5.PARP-1在人招状动绿内服增生中的作用
  与正常对理组组比,着生组内牌中 PARP-1、PONA、MMP塑MMP9 的表达明尿增加,与小佩实验结果一致。
  研究结论
  1.在高糖刺激下的 HASMCs和精压病血管中,PARP-1的表达上调。
  2.PRP!请过保进性到G1S期转推;促进 HSMC1道看∶通过上请M0MP2. 9的表达和活性,促进 HASMSCs迁移。
  3.糖城病今鼠体内。PARP-1上调可促进 VSMG增殖,丢移及内要埋厚。葱险PARP-1可有效料制工管内要建生,
  关键词
  PARP-1;鞭采病增殖∶迁移,内调滑生

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