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苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤体积和质量的影响

  • 分类:学术讲座
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  • 发布时间:2022-06-13 17:29
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【概要描述】研究苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长、上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)和凋亡标志物表达的影响

苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤体积和质量的影响

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  摘要:
  原发性肝癌是高病死率的恶性肿瘤之一,给世界各国人民的健康带来极大危害。我国是原发性肝癌的重灾区,患者数量和病死率均占世界前列。
  目前肝癌治疗尚无特效药,基本采用综合治疗方案,早期以手术治疗为主,对无法手术或者不能耐受手术的,采用TACE、姑息治疗和综合对症处理,以此控制肿瘤生长和转移,延长患者生存期。肝癌是一种具有高转移潜能的恶性肿瘤,其复发和转移是大多数肝癌患者治疗失败和死亡的主要原因。上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)被认为是肿瘤细胞扩散的初始步骤,可导致恶性肿瘤的侵袭和转移,因此抑制肿瘤细胞EMT的发生对肿瘤的治疗具有积极意义。(推荐阅读:FAO大鼠肝癌细胞Li-7人肝癌细胞肝癌原位模型
  在肝癌的预防治疗中,从中医药宝库中发掘有效的辅助治疗方法,无疑是其发展方向之一。苍术为菊科草本植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥块茎,味辛、苦,性温,具有燥湿健脾、祛风散寒的功效,是临床许多中药方剂的重要组成部分。苍术酮是从苍术中分离得到的倍半萜类有效成分,现代药理研究表明,苍术酮具有保肝、抗病毒和抗肿瘤等多种药理活性。本课题组前期研究发现苍术酮可抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移,诱导肿瘤细胞的凋亡。
  本研究拟在既往研究基础上,通过在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠(non-obese diabetes/server combined immune deficiency,NOD/SCID)小鼠左侧背部皮下种植HepG2细胞悬液的方法制备肝癌荷瘤小鼠动物模型,以进一步研究在此动物模型中苍术酮对肿瘤生长、EMT和凋亡的影响。


  目的∶
  研究苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长、上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)和凋亡标志物表达的影响。
  方法∶
  在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠左侧背部,皮下种植100 μL的HepG2细胞悬液(1×10/只)。当注射位置肿瘤生长到50~100 mm?之后,将18只小鼠随机分成对照组、苍术酮低剂量组(低剂量组)和苍术酮高剂量组(高剂量组),每组6只。苍术酮溶于玉米油中,低、高剂量组分别按照5、10mg/kg剂量灌胃给药;对照组仅给予玉米油灌胃。每日1 次,共15d。实验结束后处死小鼠,采集肿瘤瘤体组织待测。部分肿瘤组织置福尔马林中固定,石蜡包埋切片,进行免疫组化染色,用于检测Ki-67。部分肿瘤组织进行裂解抽提总蛋白,采用BCA法测定蛋白浓度,10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,半干法转移至硝酸纤维素膜,Westerm Blot法检测EMT标志物(E钙黏蛋白、N钙黏蛋白、波形蛋白和α-SMA)、EMT促进因子(MMP-2、MMP-9和TIMP-2)和凋亡相关因子(Bcl-2、Bax和裂解Caspase-3)的蛋白表达水平。结果∶苍术酮治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤的体积和质量均明显下降,其作用呈现剂量依赖性。苍术酮组Ki-67阳性染色面积均显著缩小.尤其以高剂量组最为明显。
  检测结果显示,苍术酮干预显著上调了上皮标记物(E钙黏蛋白)的表达,下调了间充质标记物(N-钙黏蛋白、波形蛋白和α-SMA)的表达;显著增加了TIMP-2的表达,降低了MMP-2和MMP-9的表达;降低了Bcl-2的表达水平,显著增加了Bax和裂解Capase-3的表达水平。
  结论
  苍术酮具有一定的体内抗肿瘤效应,可抑制EMT和降低MMP减少肝癌细胞迁移和侵袭,通过凋亡途径促进肝癌细胞的凋亡。
  关键词
  苍术酮;肝癌;荷瘤小鼠;上皮-间充质转化;细胞凋亡

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