通过动物实验与细胞实验探讨Vp在实验性哮喘气道重塑中的作用机制

分类：学术讲座
作者：【如需咨询购买细胞或技术服务,请点击24小时客服咨询或留言哦】
来源：专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
发布时间：2022-07-14 17:13
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【概要描述】研究发现，全球约有哮喘患者3.58亿P，我国成年哮喘患者多达4570万“，哮喘已成为全球性重大公共卫生问题。气道重塑不同程度地参与哮喘疾病进程，是哮喘出现不可逆气流受限、激素敏感性降低、哮喘病情持续加重的关键因素，其病理特点为气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cell，ASMC）增生肥厚，且增生程度越重病情越重ISAL

通过动物实验与细胞实验探讨Vp在实验性哮喘气道重塑中的作用机制

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　　摘要
　　哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，其特征为可逆性气流受限及气道高反应性1-2。
　　研究发现，全球约有哮喘患者3.58亿P，我国成年哮喘患者多达4570万“，哮喘已成为全球性重大公共卫生问题。气道重塑不同程度地参与哮喘疾病进程，是哮喘出现不可逆气流受限、激素敏感性降低、哮喘病情持续加重的关键因素，其病理特点为气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cell，ASMC）增生肥厚，且增生程度越重病情越重ISAL。
　　相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）通路可通过磷酸化级联反应调控细胞的增殖和凋亡，抑制血管平滑肌细胞中该通路的活性，可使下游分子YAP磷酸化（phosphorylated YAP，p-YAP）水平降低，YAP转运进入细胞核，与TEA 结构域转录因子（TEA dornain transcription factor，TEAD）结合并激活下游靶基因，引发一系列心血管疾病79。维替泊芬（verteporfin，Vp）是治疗新生血管黄斑变性的药物，近年来研究发现，其可改变YAP的空间构象而抑制YAP与TEAD的结合，进而抑制肿瘤细胞的过度增殖10。
　　与血管平滑肌细胞具有高度同源性，而Vp在哮喘气道重塑中的作用尚不清楚。本研究通过动物实验与细胞实验探讨Vp在实验性哮喘气道重塑中的作用机制。
　　目的
　　探讨维替泊芬（Vp）在动物实验性哮喘气道重塑中的作用及其机制。
　　方法
　　（1）动物实验∶将12只雌性BALB/c小鼠分为对照组、实验性哮喘组与Vp干预组，每组4只。
　　实验性哮喘组小鼠使用屋尘螨提取液（HDM）滴鼻建立哮喘模型，Vp 干预组在HDM激发前腹腔注射Vp进行干预，对照组使用等量生理盐水。
　　收集小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液（BALF），采用HE染色、Masson染色、过碘酸雪夫（PAS）染色观察肺组织病理变化，瑞氏-吉姆萨染色计数BALF中炎性细胞采用免疫组化检测肺组织中 Yes 相关蛋白（YAP）、磷酸化 Yes相关蛋白（p-YAP）的表达情况，RT-PCR、Western blotting 检测肺组织中YAP、p-YAP、骨桥蛋白（OPN）、平滑肌肌球蛋白重链（SMMHC）的表达情况。
　　（2）细胞实验∶将人气道平滑肌细胞（HASMC）分为HDM组（加入50ug/ml HDM作用24h）、HDM+Vp组（加入0.05mgLVp刺激2h后，加入50μg/mlHDM作用24hy与对照组（加入等量生理盐水），采用CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western bloting检测YAP、OPN、SMMHC蛋白的表达情况。
　　结果
　　（1）动物实验实验性哮喘组肺组织炎症较对照组加重，支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显增厚1.1340.38）um ts.（0.7940.36）μm，（6.49±2.36）pm y5.（4.56±1.52）m，（33.85±5.95）μm ×××（22.08±3.30）m，P<0.05，气道周围胶原纤维沉积面积、PAS染色阳性面积明显增多（5.85%±2.35% vx 0.36%±0.12%，28.81%=5.89% vs. 13.57%±2.08%，P<0.01），肺组织中YAP、OPNmRNA和蛋白表达水平升高（P<05或P<0.01），p-YAP/YAP比值，SMMHCmRNA 和蛋白表达水平明显下降（P<0.05或F<0.01）。
　　与实验性哮喘组比较，Vp干预组小鼠肺组织炎症减轻，支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显变薄【0.9340.27） um、（4.9941.75）μm、（26.59±2.76）μm，P<0.05），气道周围胶原纤维沉积面积、PAS 染色阳性面积明显减少（2.14%40.89%、17.92%±1.89%，P<0.05），肺组织 YAP、OPN mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05 或P<0.01），p-YAPYYAP比值、SMMFC mRNA和蛋白表达水平明显增高（P<05）。
　　（2）细胞实验HDM组细胞增殖能力较对照组增强（0.287440.0055 ws.0.2626±0.0051，P<0.01）、凋亡率降低（5.14%40.82% ws.6.75%±0.21%，P<0.05），YAP、OPN蛋白表达升高（3.1440.48 vx 1.51±0.61，5.87±2.42vx vx 0.940.23，P<0.01），SMHC蛋白表达降低（0.80.19×.2.96±0.96，P<0.01）。
　　组细胞增殖能力较HDM组减弱（0.2748±0.0043，P<0.05）、凋亡率升高（6.29%+0.49%，P<05），YAP、OPN蛋白表达下降（2.02#0.53、2.93±1.09，P<0.05），SMMHC蛋白表达升高（2.11±0.85，P<0.05）。
　　结论
　　可通过降低YAP的表达、减少YAP核移位、逆转HASMC表型转化而抑制实验性哮喘气道重塑。
　　关键词
　　动物实验，细胞实验，Hippo/YAP信号通路，维替泊芬，哮喘，气道重塑