

【概要描述】理想的JEV感染动物模型应具有以下特点∶对病原体敏感,JEV可在模型体内完成侵染复制感染模型表现有典型的临床症状,如精神萎靡,嗜睡,驼背、毛皮皱折及后肢瘫痪病理结果可判定CNS损害程度。ICR小鼠作为常用实验动物,具有适应性强,体格健壮、繁殖力强、性格温顺、易于捕捉、成熟早、生长速度快、实验重复性较好的优点,广泛应用于感染病学、神经生物学、毒理学、药理学实验04.相较于腹腔注射,皮下注射方式具有出血少、药物吸收缓慢持久等优点
【概要描述】理想的JEV感染动物模型应具有以下特点∶对病原体敏感,JEV可在模型体内完成侵染复制感染模型表现有典型的临床症状,如精神萎靡,嗜睡,驼背、毛皮皱折及后肢瘫痪病理结果可判定CNS损害程度。ICR小鼠作为常用实验动物,具有适应性强,体格健壮、繁殖力强、性格温顺、易于捕捉、成熟早、生长速度快、实验重复性较好的优点,广泛应用于感染病学、神经生物学、毒理学、药理学实验04.相较于腹腔注射,皮下注射方式具有出血少、药物吸收缓慢持久等优点
摘要
为建立可表现重症日本脑炎病毒(Japaneeeercephalitis vinus,JEV)感染中枢神经系统损害症状及病理表现的小鼠动物模型,以1日龄 ICR乳鼠为试验对象,通过皮下注射及腹腔注射方式感染,EV SA14株,观察记录乳鼠体重、临床表现、存活情况。感染第5天处死所有乳,采集脑、肺、脾、肝等4种组织,荧光定量PCR (qRT-PCR) 结合核酸电泳分析病毒感染情况,通过苏木精-伊红染色及免疫组化检测组织病理变化。结果发现,皮下感染和瘦腔感染乳鼠均于注射后第3天出现精神萎靡、嗜睡、运动功能障碍,症状逐渐加重,皮下注射感染动物模型临床状更明显。病理结果显示,乳鼠脑组织出现神经元坏死、炎症浸润现象,肺组织存在水肿充血、结构破坏。qRT-PCR产物核酸电泳显示,两种模型脑、肺、肺、肺、脾存在JEV复制,皮下注射感染模型肝组织存在病毒复制。本试验成功建立通过皮下注射感染JEV的ICR乳鼠模型,为研究卫V感染途径及发病机制奠定基础。
关键词
乙型脑炎病毒,动物模型,ICR小鼠,小鼠模型,模型小鼠
简介
日本脑炎(Japanese encephalitis,JE)是一种以库蚊为传播媒介,人类为终末宿主的人畜共患病JE的病原体日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)流行于东南亚和西太平洋地区,可对患者造成永久性中枢神经系统(central nervous system,CNS)损伤2-3。目前尚未研制针对JE的特异性治疗药物,对 JEV 感染症状仅能进行支持治疗。在我国,JEV已造成多次疫情,为社会公共卫生带来沉重负担。
目前,JEV感染小鼠模型常采用颅内、腹腔或结膜途径接种,使用C57BL/6、BALB/c及Swiss品系成年小鼠建模,用于研究JEV感染的分子机制5-7。相较于以上品系,ICR小鼠易繁殖、适应性强,重复性好,广泛应用于动物建模。同时,颅内及腹腔感染方式存在伤害大、致死性强等缺点,易造成实验建模失败。皮下感染可模拟由蚊虫叮咬造成的JEV感染发病过程,为发病机制探究、药物开发应用提供更好的研究条件。
有研究表明,与成年小鼠相比,乳鼠(21日龄)更易感染流感病毒园。新生1日龄乳鼠免疫力有限,通常需要数周至数月达到成熟,对JEV 易感冒。因此,本研究采用皮下注射及腹腔注射途径感染免疫系统尚未完全建立的1日龄ICR乳鼠,通过检测小鼠各组织病理变化及荧光定量PCR(qRT-PCR)产物核酸电泳结果,探究建立ICR小鼠的JEV 感染模型。
探讨
JE是亚洲国家病毒性脑炎的主要病因,30%~50% JE 患者可出现永久性神经系统损害,重症JE 病例死亡率高达30%【10】。自1949年报道第一例JE 病例以来,我国一直是JE在亚洲的高流行区,1971年大流行报告 JE 病例超过170 000 例,为公共卫生领域及社会稳定造成极大挑战略。因此,一种可以稳定模拟JEV感染机制,有效且可复制的动物模型对JEV的致病机制探究、药物研发具有重要意义.
理想的JEV感染动物模型应具有以下特点∶对病原体敏感,JEV可在模型体内完成侵染复制感染模型表现有典型的临床症状,如精神萎靡,嗜睡,驼背、毛皮皱折及后肢瘫痪病理结果可判定CNS损害程度。ICR小鼠作为常用实验动物,具有适应性强,体格健壮、繁殖力强、性格温顺、易于捕捉、成熟早、生长速度快、实验重复性较好的优点,广泛应用于感染病学、神经生物学、毒理学、药理学实验04.相较于腹腔注射,皮下注射方式具有出血少、药物吸收缓慢持久等优点.
使用1日龄ICR乳鼠建立JEV动物感染模型,使用皮下、腹腔2种注射途径感染乳鼠.结果显示,注射20μL病毒滴度为10^PFU/100μL的正V可引起1日龄乳鼠震颤、嗜睡、肢体麻痹等临床症状.与IP组对比,SC组乳鼠临床症状更为明显,易于判断JEV 侵染程度及感染状态从生长发育情况看,两种感染方式均造成乳鼠体重增长减缓。生存曲线表明,SC组存活率高于IP组,可在有效模拟感染进程的同时提供更多样本。HE染色及免疫组化显示,两种感染方式均造成乳鼠神经元坏死、炎症浸润,肺组织充血水肿,肝脏及脾脏存在巨噬、单核细胞免疫阳性偏号·脑组织病毒载量显示,皮下注射感染与腹腔注射感染乳鼠脑组织病毒载量显著高于对照组∶感染后第1、3、5天样本qRT-PCR产物核酸电泳显示,两种模型均可模拟JEV感染脑部发病过程,SC感染模型可更好模拟JEV在外周器官感染进程.
由此得出以下结论∶SC可更好地模拟自然条件下 IEV 感染进程, 综合考虑取材时间、感染方式、感染效果、实用性等问题,认为SC感染JEV所建立的ICR动物模型更具优势-综上,本试验建立一种新的JEV感染ICR乳鼠模型,为JEV发病机制研究和抗病毒药物研发筛选提供了有力工具.
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