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田鼠巴贝虫丽水分离株小鼠感染动物模型的建立制备及其病理变化

  • 分类:学术讲座
  • 作者:【如需咨询购买细胞或技术服务,请点击24小时客服咨询或留言哦】
  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2022-08-23 10:54
  • 访问量:

【概要描述】建立田鼠巴贝虫丽水分离株(分离自浙江丽水患者,简称丽水分离株)BALB/e小鼠感染动物模型,研究小鼠感染后的原虫血症动态变化和病理特征。

田鼠巴贝虫丽水分离株小鼠感染动物模型的建立制备及其病理变化

【概要描述】建立田鼠巴贝虫丽水分离株(分离自浙江丽水患者,简称丽水分离株)BALB/e小鼠感染动物模型,研究小鼠感染后的原虫血症动态变化和病理特征。

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  摘要
  巴贝虫(Babesia)是一种呈世界分布的寄生性血液原虫,可感染人、牛、马和犬等哺乳动物,导致巴贝虫病。随着世界各地的密切交往和患者输血增加,在热带和亚热带地区,人巴贝虫病在公共卫生领域逐渐引起人们关注,成为影响公众健康的重大问题之一。
  巴贝虫主要经蜱叮咬或输血等途径传播,可感染人或其他脊椎动物。在100多种巴贝虫中,已知田鼠巴贝虫(B.microti)、分歧巴贝虫(B.divergens)、邓氏巴贝虫(B.duncani)和巴贝虫MO1株(Babesia sp.MO1)等可感染人。
  2011——2015年美国累计报告7612例巴贝虫感染者。1944—2019年,我国累计报告314例巴贝虫感染者,分布在14个省(直辖市、自治区),其中,黑龙江报告最多,其次是重庆、云南等。巴贝虫病患者的临床症状包括发热、贫血、血小板减少、寒战、乏力、食欲不振、恶心、头痛等。
  2020年,张艳等报道1例误诊为疟疾的田鼠巴贝虫病的患者,患者来自浙江丽水,薄血膜涂片中可见红细胞内有逗点形和环形虫体,送浙江省疾病预防控制中心鉴定,恶性疟原虫(Plasmodium fulciprum)快速诊断检测结果为阴性,PCR检测扩增出田鼠巴贝虫特异性条带,确诊为田鼠巴贝虫病。
  为阐明从该患者分离的田鼠巴贝虫的致病特征,本研究用丽水分离株构建BALB/c小鼠感染动物模型,分析感染小鼠原虫血症、体质量、脾和血常规等指标的变化情况。
  目的
  建立田鼠巴贝虫丽水分离株(分离自浙江丽水患者,简称丽水分离株)BALB/e小鼠感染动物模型,研究小鼠感染后的原虫血症动态变化和病理特征。
  方法
  用浙江丽水田鼠巴贝虫病患者的全血血样腹腔接种NOD-SCID小鼠进行保种、分离田鼠巴贝虫。50只BALB/e小鼠随机分为感染组和对照组(每(每25只),感染组每鼠腹腔接种1.0×10个NOD-SCID小鼠田鼠巴贝虫感染红细胞,对照组小鼠接种等量生理盐水。每日采小鼠尾静脉血制备薄血膜片,吉氏染色后显微镜下观察原虫形态,分析原虫血症。用DNA提取试剂盒提取感染小鼠血样 DNA,巢式 PCR 扩增巴贝虫18S rRNA 基因,测序后进行基因型鉴定和系统进化树分析。感染后0、5、10、15和20d,每组分别取5只小鼠,测量体质量、脾长度和质量,制备脾组织切片,HE染色显微镜下观察脾组织病理特征;采用动物全自动血液分析仪检测感染小鼠血常规。组间比较采用T检验。
  结果


  感染后5d,感染组小鼠血涂片中可见单个环状体感染后10d,同一红细胞中可见2个或4个虫体,呈双梨形或马耳他十字形,并有细胞溶血现象;感染后15和20d,红细胞内虫体仍以环状体为主。
  感染后10d,感染组小鼠的原虫血症达到峰值,为(39.1±4.6)%感染后20d,原虫血症降至1%以下。
  田鼠巴贝虫丽水分离株18S rRNA基因序列与田鼠巴贝虫(GenBank 登录号MT423326)的一致性为98%,在系统进化树上聚在同一分支上。
  感染后10、15和20d,感染组小鼠体质量分别为(20.60±1.02)、(22.04±0.77)和(22.78±0.64)g,均低于对照组【(23.94±0.84)、(24.50±0.26)和(24.64±0.54)gl(t=5.64、6.78和4.99,P<0.01)。感染后5、10、15 和 20 d,感染组小鼠脾质量分别为(0.33±0.02)、(0.98±0.11)、(0.93±0.04)和(0.67±0.05)g,均高于对照组 【(0.11±0.01)、(0.12±0.01)、(0.10±0.02)和(0.11±0.01)g(r=21.82、225、35.62和1047,P<0.01);脾长度分别为(2.40±0.12)、(3.16±0.06)、(3.22±0.05)和(2.98±0.08)cm,均高于对照组小鼠【(1.76±0.09)、(1.74±0.09)、(1.74±0.15)和(1.80±0.07)m】(t=9.44、30.27、20.93和24.09,P<0.01)。感染后10d,感染组小鼠脾明显肿大,组织结构紊乱,白髓和红髓交界的边缘区模糊,脾窦充血,淋巴细胞大量浸润;感染后20d,脾组织实质结构恢复,红髓、白髓分布清晰。
  血常规结果显示,感染后10d,感染组小鼠红细胞计数、红细胞压积、血红蛋白浓度、平均血细胞体积、红细胞分布宽度标准差、红细胞分布宽度变异系数、平均血红蛋白含量和平均血红蛋白浓度分别为(4.45±0.32)×10℃%、(27.72±2.03)%、(86.2±6.0)g/L、(60.7±1.4)fL、(80.1±4.0)fL、(31.9±1.3)%、(19.4±0.4)pg和(320.4±3.8)g/L,与对照组【(9.55±0.16)×10?L、(47.94±1.64)%、(163.0±4.8)g/L、(48.2±1.1)fL、(27.7±1.3)fL、(13.5±0.5)%、(16.7±0.7)四和(339.0±3.9)g/L】相比,差异有统计学意义(t=32.24、17.34、22.23、15.71、30.33、28.41、7.43和7.61,P<0.01);感染后10d,感染组小鼠白细胞计数、单核细胞计数和百分比、中性粒细胞计数和百分比分别为(6.76±0.87)×10P/L、(0.78±0.20)×107L、(9.9±0.87)%、(1.92±0.42)×107L和(27.74±2.67)%,与对照组【(3.85±0.26)×107L、(0.17±0.05)×107L、(3.28±0.40)%、(0.78±0.15)×10℃和(21.20±1.18)%】相比,差异有统计学意义(t=7.12、6.54、15.54、5.71和5.00,P<0.01)。
  结论
  建立了从人体分离的田鼠巴贝虫丽水分离株小鼠感染模型,小鼠感染后体质量显著减轻、脾肿大、脾组织结构紊乱、贫血严重。
  关键词
  田鼠巴贝虫,小鼠动物模型,脾脏,病理特征,小鼠感染模型,小鼠模型,模型小鼠,动物模型

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