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构建符合临床损伤特征的宫腔黏连动物模型 为深入研究 IUA 的发病机制、病理变化以及探索临床治疗方案提供支持

  • 分类:学术讲座
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  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2022-09-23 10:02
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【概要描述】建立符合临床损伤特征的IUA动物模型,可为深入研究IUA的发病机制和病理变化,探索临床治疗方法提供重要工具和保障。前期研究大多通过动物开腹后,利用机械、电凝及酒精等对模型动物子宫内膜进行损伤,引发模型动物产生类似临床 IUA 症状。但通过开腹方式构建 IUA 模型,必须经子宫外侧浆膜层及肌层进入,会造成子宫局部全层的损伤,与临床常见原因造成 IUA 的损伤特点存在差异

构建符合临床损伤特征的宫腔黏连动物模型 为深入研究 IUA 的发病机制、病理变化以及探索临床治疗方案提供支持

【概要描述】建立符合临床损伤特征的IUA动物模型,可为深入研究IUA的发病机制和病理变化,探索临床治疗方法提供重要工具和保障。前期研究大多通过动物开腹后,利用机械、电凝及酒精等对模型动物子宫内膜进行损伤,引发模型动物产生类似临床 IUA 症状。但通过开腹方式构建 IUA 模型,必须经子宫外侧浆膜层及肌层进入,会造成子宫局部全层的损伤,与临床常见原因造成 IUA 的损伤特点存在差异

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  摘要
  子宫内膜作为具有高度再生能力的组织,是由上皮细胞(包括管腔上皮细胞和腺上皮细胞)和支持间质细胞构成,其在女性育龄期内经历约400多个周期性的再生与脱落。
  子宫内膜被划分为功能层和基底层,内膜表面约 2/3 厚度为致密层和海绵层统称功能层,受卵巢性激素影响发生周期性增殖和脱落;而基底层为靠近子宫肌层的约 1/3 厚度内膜,不受卵巢性激素影响,无周期性变化PL。
  宫腔粘连(intrauterine adhesion, IUA)是指子宫内膜间质大部分被纤维组织取代,功能层被单层上皮细胞取代,由于单层柱状上皮细胞对雌激素刺激无反应,子宫内膜无法正常再生,形成纤维性瘢痕组织。已知 IUA 的发生主要由不完全流产后的扩张刮除术、产后出血及选择性流产引起,其他少见诱发因素包括子宫肌瘤切除术、诊断刮除术、剖宫产术、生殖道结核和子宫填塞等。
  随着宫腔镜和妇科手术的普及,IUA 的发生率不断上升,患者主要表现为月经紊乱,如闭经、痛经和月经过少,上述变化均显著影响胚胎着床,导致患者出现反复流产或不孕等生育功能障碍。
  并且IUA患者常规宫腔镜手术后所引起的妊娠并发症如∶早产、胎盘植入及产后出血等,严重影响患者的生理和心理健康。
  因此,建立符合临床损伤特征的IUA动物模型,可为深入研究IUA的发病机制和病理变化,探索临床治疗方法提供重要工具和保障。前期研究大多通过动物开腹后,利用机械、电凝及酒精等对模型动物子宫内膜进行损伤,引发模型动物产生类似临床 IUA 症状。但通过开腹方式构建 IUA 模型,必须经子宫外侧浆膜层及肌层进入,会造成子宫局部全层的损伤,与临床常见原因造成 IUA 的损伤特点存在差异。
  因此,本构建方法采用小鼠作为模型动物,通过微创的方式保留子宫全层结构,经宫颈机械损伤+脂多糖灌注法构建宫腔粘连模型,为后续机制及治疗方法研究提供稳定的动物模型
  目的
  通过微创的方式,利用机械损伤联合脂多糖灌注法构建符合临床损伤特征的宫腔黏连(intrauterine adhesion,IUA)动物模型,为深入研究 IUA 的发病机制、病理变化以及探索临床治疗方案提供支持。
  方法
  取雌性ICR 小鼠 20 只随机分为 2 组(n=10),间苯三酚松弛宫颈后,造模组动物经宫颈给予宫腔内机械损伤+脂多糖(LPS)灌注(0.5 mg/kg),假手术组动物仅接受等体积生理盐水灌注。分别于术后7、14、21 d收集子宫标本,常规 HE 和 Masson 染色,检测子宫内膜形态及纤维化情况;免疫荧光检测子宫内膜中巨噬细胞(F4/80)分布,qPCR 及 Western Blot 检测造模 14 d小鼠子宫内膜中炎症因子(IL-18、TNF-α、Ⅱ-4、L-10和IL-6)及子宫内膜容受性相关标志物(Integrin β3和LIF)的表达变化。随后,取20只小鼠随机分为经宫颈机械损伤+脂多糖灌注组(n=10)为造模组和假手术组(n=10),造模 2 周后合笼,记录妊娠母鼠数量;妊娠约18d处死母鼠,记录胚胎数量。
  结果


  机械损伤+脂多糖灌注后小鼠子宫中炎症反应和纤维化程度显著增加。其中模型组小鼠子宫内膜厚度较假手术组显著降低,子宫内膜细胞坏死明显,腺体缺失,腔上皮和腺上皮细胞结构不完整,组织纤维化严重。随后,检测发现巨噬细胞标志物 F4/80在模型组小鼠子宫内膜中表达显著上升(P<0.05),并且模型组小鼠子宫内膜中促炎因子IL-1β、TNF-α、和Ⅱ-6表达显著升高(P<0.05),而抑炎因子IL-4、IL-10表达明显下降(P<0.05)。进一步研究发现子宫内膜容受性标志物LIF和Integrinβ3表达量显著下降(P<0.05),且生育实验结果发现妊娠母鼠及胎鼠数量均显著下降(P<0.05)。
  结论
  本研究通过微创的方式经宫颈机械损伤+脂多糖灌注,成功建立小鼠 IUA 模型构建方法,符合临床IUA损伤特征,可为后续针对IUA发病机制及治疗方法研究提供稳定的动物模型。
  关键词
  宫腔粘连,机械损伤,脂多糖,动物模型,小鼠模型,模型小鼠,动物造模,模型动物

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