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体外细胞实验及体内脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导OA动物模型,证实Avagacestat 抑制破骨细胞形成并可进一步减少溶骨活动

  • 分类:学术讲座
  • 作者:【如需咨询购买细胞或技术服务,请点击24小时客服咨询或留言哦】
  • 来源:典藏逾1000+株细胞,供ATCC原装代购服务,临床前CRO服务,众多科研技术服务,定制各类疾病动物模型
  • 发布时间:2022-10-25 09:52
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【概要描述】提取6周龄C57鼠骨髓细胞诱导为巨噬细胞扩增培养,加入M-CSF及RANKL诱导后通过CCK8测定Avagacestat对该细胞的半数抑制浓度(IC)),设置0、120、240mmol/L3种Avagacestat浓度组,对比破骨细胞形成实验、功能实验并检测3组细胞TRAP、C-fos、Cath-K 等破骨相关基因的表达。建立LPS诱导关节炎实验动物模型,通过三维骨重建检测软骨下骨溶解情况、通过HE 染色及TRAP染色检测破骨细胞分布情况

体外细胞实验及体内脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导OA动物模型,证实Avagacestat 抑制破骨细胞形成并可进一步减少溶骨活动

【概要描述】提取6周龄C57鼠骨髓细胞诱导为巨噬细胞扩增培养,加入M-CSF及RANKL诱导后通过CCK8测定Avagacestat对该细胞的半数抑制浓度(IC)),设置0、120、240mmol/L3种Avagacestat浓度组,对比破骨细胞形成实验、功能实验并检测3组细胞TRAP、C-fos、Cath-K 等破骨相关基因的表达。建立LPS诱导关节炎实验动物模型,通过三维骨重建检测软骨下骨溶解情况、通过HE 染色及TRAP染色检测破骨细胞分布情况

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  关键词
  关节炎模型,关节炎动物模型,动物模型,小鼠模型,模型小鼠
  摘要
  骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的影响整个关节肌肉骨骼结构的退行性疾病,其特点是关节软骨和软骨下骨均发生进行性破坏0-2。关节软骨的完整性依赖于软骨下骨,在 OA 相关的骨代谢改变中,破骨细胞活性增加被认为是OA发展过程中软骨变性的早期促发因素。在骨关节炎的早期阶段,破骨细胞活性升高致使软骨下骨密度显著减低、骨与软骨连接处结构的完整性丧失,并促进软骨变性发生。
  破骨细胞作为一种独特的、高度特化的多核巨细胞,具有显著的降解矿化骨和软骨基质的能力,通过分泌酸和蛋白酶降解骨基质,如抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)和组织蛋白酶K参与破骨活动D-8,多种信号通路参与了此过程的调节,其中NOTCH相关信号通路,作为细胞分化成熟相关的信号通路,通过与肿瘤坏死因子α转换酶(tumor necrosis factor α-covertinng en-zyme,TACE)、γ-分泌酶相互反应,调节 RB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kB ligand,RANKL),进而参与破骨细胞分化成熟及骨破坏的过程 9-12。
  Avagacestat是一种γ-分泌酶选择性抑制剂,既往研究报道提示其具有调节NOTCH信号通路的作用,但其是否可以抑制破骨细胞形成及骨溶解进而对骨关节炎有潜在治疗价值未见报道。本研究中,我们通过体外细胞实验及体内脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导OA模型,证实Avagacestat 抑制破骨细胞形成并可进一步减少溶骨活动。
  目的
  探究 y-分泌酶抑制剂 Avagacestat 通过抑制破骨细胞的形成及溶骨功能,抑制骨关节炎的进展。
  方法
  提取6周龄C57鼠骨髓细胞诱导为巨噬细胞扩增培养,加入M-CSF及RANKL诱导后通过CCK8测定Avagacestat对该细胞的半数抑制浓度(IC)),设置0、120、240mmol/L3种Avagacestat浓度组,对比破骨细胞形成实验、功能实验并检测3组细胞TRAP、C-fos、Cath-K 等破骨相关基因的表达。建立LPS诱导关节炎实验动物模型,通过三维骨重建检测软骨下骨溶解情况、通过HE 染色及TRAP染色检测破骨细胞分布情况。
  结果
  在24、48、96h3个时间点,Avagacestat 对破骨细胞的IC。分别为493、426、405 mmol/L。TRAP实验显示 Avagacestat抑制破骨细胞形成,骨板骨吸收实验证实Avagacest抑制溶骨功能,且240mol/L浓度的Avagacestat对破骨细胞形成及功能的抑制显著高于120mmol/L;RT-PCR结果提示,加药后溶骨相关基因TRAP、C-os、CathK表达显著下降,差异具有统计学意义。LPS 诱导的骨关节炎模型中三维骨重建及TRAP染色都表明破骨细胞数量显著增多、骨溶解增强,而 Avagacestat 对此有明显的抑制作用,表现为骨密度、骨小梁数量加药后增加、破骨细胞数量加药后减少,差异具有统计学意义。


  结论
  Avagacestat抑制破骨细胞形成、溶骨相关基因表达及溶骨功能,因此可以作为治疗骨关节炎的潜在药物。

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