摘要
　　特发性炎性肌病,NADPH氧化酶,实验性自身免疫性,肌炎动物模型,小鼠模型,模型小鼠
　　特发性炎性肌病（Idiopathic inflammatory myop~athy，IIM）是一种以肌无力和肌肉炎症为特征的异质性疾病，包括多发性肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、免疫介导的坏死性肌病和抗合成酶综合征0-4；其主要表现为肌无力、肌痛，出现特征性皮疹，血清肌酶水平升高，肌肉活检显示肌纤维变性和再生、慢性单核细胞浸润及肌束周围萎缩。目前ⅡM发病机制仍不清楚，多认为是遗传、环境、免疫机制和非免疫机制（内质网应激、活性氧的产生、自噬调节异常、缺氧、血管新生）等多因素相互作用的结果。国内外多采用兔或豚鼠骨骼肌匀浆免疫诱导实验性自身免疫性肌炎（Experimental autoimmune myositis，EAM）动物模型，其操作简单、成本较低、建模效果好，为研究IIM 提供了良好的基础。
　　铁死亡是一种铁依赖性的，以细胞内活性氧（Reactive oxygen species，ROS）累积为特征的调节性细胞死亡形式。参与铁死亡的ROS有多种产生来源，除了铁介导的芬顿反应产生ROS外，依赖NAD-PH的NADPH氧化酶（Nicotinamide adenine dinu-cleotide phosphate oxidases，NOXs）和谷胱甘肽的耗竭同样对ROS的产生起着重要作用。活性氧为一系列分子氧的衍生物，主要包括非自由基（H2O2、ROOH、'O2、OG、HOCl、HOBr）和自由基（O"）、·OH、ROO·、RO·）。适量的ROS可以促进细胞增殖、分化，参与细胞信号通路的调节然而当ROS生成量超过机体调节能力时，则会引起炎症反应、氧化应激，从而导致细胞生理功能紊乱，触发细胞损伤或死亡。研究表明，NOXs是体内ROS的重要来源，细胞通过依赖NADPH的电子还原系统将体内的氧分子还原成超氧阴离子，各种生长因子、细胞因子、炎症介质等刺激均可活化NOXs，消耗NADPH，产生大量的ROSO。NOXs有7种亚型，分别是NOX1、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5、DUOX1及DUOX2，骨骼肌组织表达三种NOXs亚型（NOX1、NOX2和NOX4），NOX1在骨骼肌组织中的生理作用尚未明确，NOX2和NOX4是骨骼肌组织中ROS的主要来源。有研究报道当骨骼肌组织肌管中产生大量ROS时可导致炎症细胞浸润，线粒体功能障碍，进而发生肌肉收缩功能失调、肌无力。NOXs介导的ROS已被证实参与了代谢性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、动脉粥样硬化等的发生、发展过程9-5.而在IIM中的作用尚不清楚。本研究通过检测EAM小鼠骨骼肌组织中NADPH、NOX2、NOX4和ROS的表达情况，探讨NOXs中的NOX2和NOX4介导的ROS在IIM发生和发展中的作用。
　　目的
　　探讨NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的活性氧（ROS）在特发性炎性肌病（IM）发病机制中的作用及意义。
　　方法
　　将14只健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组（n=6）和EAM组（n=8），EAM组小鼠采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白免疫诱导实验性自身免疫性肌炎动物模型。观察小鼠的体重变化、临床表现，测定其血清肌酶水平、四肢肌力及骨骼肌组织病理改变；并采用免疫组织化学法、分光光度法和ELISA法分别检测各组小鼠骨骼肌组织中NOX2、NOX4、NADPH及ROS的表达情况或含量。
　　结果
　　与对照组相比，末次免疫后1周EAM组小鼠体重下降，差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色结果显示，对照组小鼠骨骼肌纤维大小、形态、结构基本正常，有少量炎性细胞浸润，未见肌纤维萎缩、变性、坏死EAM组小鼠骨骼肌纤维大小不一、粗细不等，有大量炎性细胞浸润，可见不同程度的萎缩、变性、坏死；EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分显著高于对照组（P<0.05）。与对照组相比，EAM组小鼠骨骼肌组织中NADPH含量降低、ROS含量升高（P<0.05）。免疫组化染色结果显示，NOX2和NOX4在EAM组小鼠骨骼肌组织中的表达均高于对照组（P<0.05）。Pearson相关分析结果显示，EAM组小鼠骨骼肌组织中ROS的含量与NOX2、NOX4的免疫组化评分均呈正相关（P<0.05），而与NADPH的含量呈负相关（P<Q 05）；EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分与NOX2、NOX4的免疫组化评分及ROS的含量均呈正相关（P<0.05），而与NADPH的含量呈负相关（P<Q05）。

　　结论
　　NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4可能通过消耗NADPH产生大量的ROS，导致组织细胞氧化性损伤并诱导铁死亡反应来参与IIM的发病；NADPH、NOX2、NOX4和ROS有望成为新的评价ⅡM肌肉组织损伤程度的指标。