

【概要描述】本课题前期通过高压水动力尾静脉注射人工合成的 cccDNA 到小鼠体内,仅对小鼠观察了 26 周,虽然 HBV 主要标志物均为阳性,但是却为发现小鼠肝纤维化。由于HBV所致肝病变是一个慢性感染过程,本实验以同样方法建立 HBY感染小鼠模型,持续观察到68周,除发现小鼠 HBY 标志物部分阳性外,最终出现了小鼠肝纤维化表型,甚至部分小鼠出现HBV基因突变所致的HBsAg阴性(HBsAgr)或 HBeAg 阴性(HBeAg)。此研究结果为肝纤维化药物评价及 HBsAg 或 HBeAg 转阴机制研究的模型建立提供理论基础
【概要描述】本课题前期通过高压水动力尾静脉注射人工合成的 cccDNA 到小鼠体内,仅对小鼠观察了 26 周,虽然 HBV 主要标志物均为阳性,但是却为发现小鼠肝纤维化。由于HBV所致肝病变是一个慢性感染过程,本实验以同样方法建立 HBY感染小鼠模型,持续观察到68周,除发现小鼠 HBY 标志物部分阳性外,最终出现了小鼠肝纤维化表型,甚至部分小鼠出现HBV基因突变所致的HBsAg阴性(HBsAgr)或 HBeAg 阴性(HBeAg)。此研究结果为肝纤维化药物评价及 HBsAg 或 HBeAg 转阴机制研究的模型建立提供理论基础
摘要
HBV小鼠模型,小鼠模型,模型小鼠,动物模型,HBV模型,肝纤维化小鼠动物模型
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种存在于患者血液中,在肝组织中以共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)为模板进行复制的一种全球广泛传播的病毒,可以引起急慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化、甚至肝癌0-21。据统计全球每年患有慢性乙肝的患者有3亿人,死于HBV相关的肝炎患者有100万P+0。HBV感染所致肝纤维化动物模型对HBV的发病及治疗研究具有十分重要的意义。
HBV小鼠模型主要包括人源化肝小鼠、转基因小鼠、重组病毒载体转导的小鼠模型以及三种手段相结合的小鼠模型,目前这些模型已被广泛应用于乙肝病毒疾病及机制研究回。但是,上述模型的共同不足是均难以形成肝纤维化,成为HBV相关肝纤维化发病机制及其药物评价的瓶颈。
本课题前期通过高压水动力尾静脉注射人工合成的 cccDNA 到小鼠体内,仅对小鼠观察了 26 周,虽然 HBV 主要标志物均为阳性,但是却为发现小鼠肝纤维化。由于HBV所致肝病变是一个慢性感染过程,本实验以同样方法建立 HBY感染小鼠模型,持续观察到68周,除发现小鼠 HBY 标志物部分阳性外,最终出现了小鼠肝纤维化表型,甚至部分小鼠出现HBV基因突变所致的HBsAg阴性(HBsAgr)或 HBeAg 阴性(HBeAg)。此研究结果为肝纤维化药物评价及 HBsAg 或 HBeAg 转阴机制研究的模型建立提供理论基础。
目的
探索 HBV感染所致肝纤维化小鼠模型形成条件及表型分析。
方法
以CBA/CaJ小鼠为研究对象,按照每只2μg的剂量、通过高压水动力方法进行尾静脉注射cccDNA,转染68周后采样。通过 qPCR方法检测肝中HBV DNA及 HBV cccDNA,ELISA方法检测血清 HBsAg、HBeAg,免疫组化检测肝组织中HBsAg、HBcAg,用一代测序法检测HBeAg*/HBsAg-及 HBeAg/HBsAgt组织 DNA 基因测序,生化分析 ALT和 AST,HE染色、天狼星染色及Masson染色分析肝组织病理。
结果
实验组中(n=14),100%的小鼠 HBV-DNA拷贝数高于1000 copies/mL;小鼠肝组织 cccDNA 拷贝数显著高于空白组(P< 0.05);42.9%的小鼠血清 HBsAg 和 HBeAg 呈阳性;60%的小鼠肝HBsAg呈阳性和26.7%的小鼠肝HBcAg呈阳性;HBeAg/HBsAg+样本中出现A1762T/G1764A和G1896A/G1899A位点突变,HBeAgt/HBsAgr样本出现前 S2区及 S区多位点突变;小鼠 ALT值异常率为57.1%,AST 值异常率为7.1%; HE 染色观察到所以实验组小鼠肝组织损伤及肝炎症浸润,天狼星染色、Masson染色观察到92.9%的肝组织发生纤维化。
结论
通过昆静脉高压水动力注射CBA/CaJ小鼠 HBY cocDNA 68周后,HBV主要标志物仍然阳性,HBV 感染可引起小鼠肝纤维化,甚至可模拟临床HBVBCP/PC基因突变表型。
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