摘要
　　小鼠模型,肺癌原位模型,原位动物模型,CDX肿瘤模型,肿瘤模型小鼠,原位移植瘤的模型,PDX模型
　　肿瘤的发生、发展与肿瘤微环境（tumor microenvi-ronment，TME）密切相关，肿瘤微环境研究中常用到的小鼠动物模型有自发性或诱导肿瘤小鼠模型、基因工程肿瘤细胞（cell derived xenograft，CDX）小鼠模型、人源移植瘤（patient derived xenograft，PDX）小鼠模型和人源免疫系统-肿瘤小鼠模型等Ⅱ，并通过小鼠肿瘤组织，小鼠外周血、肺泡灌洗液、腹水等多种方式检测肿瘤机体和肿瘤微环境中免疫细胞的变化和影响
　　在肿瘤微环境中除肿瘤细胞与间质细胞外，最重要的是免疫细胞，如淋巴细胞、肿瘤相关巨噬细胞（tunior associated macrophage，TAM）、自然杀伤（nalu-ral killer，NK）细胞等，它们影响着肿瘤的发生和进展览.对于小鼠模型来说，研究TME中的淋巴细胞最好的模型是人源免疫系统-肿瘤小鼠模型。但由于价格昂贵且具有窗口期（4-10周），人源免疫系统-肿瘤小鼠模型并不能得到广泛的应用。除了TME中有大量的淋巴细胞之外，TAM也是其中一种重要的免疫细胞。TAM具有多种功能，与癌症的发展和进展有关国。另外，越来越多的研究圈表明，肿瘤细胞可以通过多种机制诱导 NK 细胞功能紊乱，从而逃避NK细胞的监视。因此，TME中的TAM和NK 细胞也成为了研究的热点。
　　目前，用于建立CDX的Balb/c裸鼠是研究TME 很好的小鼠模型。因为浸润在TME中的TAM和NK 细胞是对CDX肿瘤造成影响的直接原因.裸鼠TAM的免疫标志物是F4/800，NK的标志物是CD11b/CD27黑，单独标记这两种细胞的研究报道有很多，但是在CDX的小鼠免疫微环境中，同时研究巨噬细胞和NK细胞对人肿瘤影响的报道却很少。
　　本研究利用高速精确多色流式细胞仪设计了一个11色的流式细胞术检测方案，同时检测TAM （CD45.2*/CDI1b*/F4-80*）及分类，如巨噬细胞M1 型（CD86*）、巨噬细胞M2型（CD206*）与原位接种肺癌CDX肿瘤细胞（hCD326*/CD45.27）之间的关系。同时检测NK细胞（Ly6C-/CD49*）及其分类CDI1b/CD27单阳（single positive，SP）或双阳（double positive，DP）细胞与原位接种肺癌CDX肿瘤细胞之间的关系。本团队既往研究 显示，溶瘤病毒能有效抑制肺癌的进展，同时，利用这个平台验证了该治疗的有效性与免疫细胞的分型转化有关。笔者认为，这种流式细胞检测方法可以提供给更多研究者参考。让研究者验证其实验中免疫细胞，尤其是TAM和NK细胞，在CDX或PDX模型中的变化。以证明干预TME中的免疫细胞是治疗肿瘤的一种有效手段.(推荐阅读：Yac-1小鼠白血病细胞NK细胞靶细胞)
　　目的
　　对肺癌原位接种的小鼠模型，设计并建立了11色的免疫细胞分类方法，对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤（nutural killer，NK）细胞进行更加细致的分型，从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。
　　方法
　　建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案，对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9 细胞于裸鼠体内，通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞，以及不同成熟程度的 NK 细胞。
　　结果
　　11 色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应，减少荧光串色。对小鼠血液标本，通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本，能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施，发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。

　　结论
　　在原位移植瘤的模型中，该1色色色疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类，为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段，并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。