摘要
　　脊髓损伤模型,大鼠模型,模型大鼠,动物模型制备,动物实验
　　脊髓损伤是中枢神经系统的灾难性损伤，全世界每年脊髓损伤发病率为8例/百万-246例/百万通。由于脊髓损伤致残率、致死率高，且随着脊髓损伤发病人数不断增加，给个人、家庭和社会带来了沉重的负担，如何有效治疗脊髓损伤成为亟待解决的问题。脊髓损伤后，继发性损伤为原发损伤后一系列“瀑布式”生物化学反应，“脊髓微环境失衡”被认为是继发性脊髓损伤加重的原因②，而血脊髓屏障是维持脊髓微环境稳定的重要因素。因此在脊髓损伤后如何维持血脊髓屏障结构和功能的完整性，是降低继发性脊髓损伤的关键点所在。
　　间充质干细胞移植疗法是目前公认的一种可以减少血脊髓屏障损伤、改善神经功能、治疗脊髓损伤的有效方法D-51，但是具有低存活率、肿瘤形成和靶向性差等局限性。干细胞分泌的外泌体携带多种RNA、蛋白质和其他生物活性物质团。研究显示，在创伤性脊髓损伤的治疗中，干细胞来源外泌体可以减少损伤区炎症反应，改善脊髓微环境，促进神经功能恢复B-9，然而其改善脊髓微环境的机制仍不清楚。内皮素1（endothelin-1，ET-1）是目前已知的一种强烈的缩血管细胞因子，不仅分布于神经系统的血管内皮细胞，还广泛分布于脑和脊髓组织中的神经细胞、胶质细胞和背根神经节内。研究发现，血管内皮素1对血脊髓屏障的破坏有重要的调控作用，其可以直接作用于脊髓微血管，调节微血管结构这表明内皮素1参与了以损伤为中心的轴向血脊髓屏障的破坏.脊髓损伤后早期，内皮素1主要表达于神经元细胞内131。
　　姜亮等研究发现内皮素1在急性期的作用机制包括：
　　①可能直接作用于脊髓微血管，导致微血痉挛，引起脊髓缺血缺氧；
　　②可能通过改变血管内皮非特异性转运机制的特性，使血脊髓屏障的通透性增高；
　　③破坏血脊髓屏障完整性。脊髓损伤后，神经组织出现缺血缺氧现象，缺氧可促进内皮细胞中内皮素1的基因表达，进而内皮素1合成增加，内皮素1的生物学作用会加重微血管收缩，导致组织进一步缺血缺氧和血脊髓屏障损伤。
　　彭新生等研究证实，内皮素参与脊髓损伤后血脊髓屏障破坏，并且使用内皮素1受体拮抗剂后，减轻了血脊髓屏障的损伤。
　　研究发现，内皮素参与了脊髓损伤后血脊髓屏障的破坏，干细胞来源外泌体可降低血脊髓屏障的通透性，修复脊髓损伤。
　　目的
　　观察人脐带间充质干细胞来源外泌体是否可以通过抑制内皮素1表达降低血脊髓屏障的通透性，进而修复脊髓损伤。
　　方法
　　用超速离心法从人脐带间充质干细胞培养上清液中提取外泌体，透射电子显微镜观察其形态，Western blot检测tg201、CD63的表达。80只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、外泌体组、内皮素1组（r=20），采用改良Alen's法制备大鼠脊髓损伤动物模型，内皮素1组用微量注射器直接向损伤部位注射10μllug/mL）内皮素1，术后即刻及1，2d，分别给予假手术组、模型组厚静脉注射200μLPBS，外泌体绍、内皮素1组尾静脉注射200μL外泌体200μg/mll。脊髓损伤后第1，3，7，14，21天讲行后防运功功能评分：损伤后第7天通过伊文思药染色观察血脊髓屏障通透性，Western blot检测脊髓组织中紧密连接蛋白ZO-1、β-Catenin、Occludin和内皮素1的表达。
　　结果
　　①外泌体组BBB评分在损伤后3-21d显著高于模型组IP<005），苏木精-伊红染色显示外泌体组脊髓损伤较模型组明显减轻：内皮素1组BBB评分较外泌体组显著降低（P<0.05），内皮素1组脊髓损伤较外泌体组加重；
　　②模型组内皮素1表达量较假手术组显著增加（P<0.05），外泌体组内皮素1表达量较模型组显著降低（P<0.05）；
　　③与模型组比较，外泌体组血脊髓屏障伊文思蓝渗出量显著减少IP<0.05），紧密连接蛋白β-Catenin、Occludin、ZO-1的表达增加（P<0.05）；与外泌体组比较，内皮素1组伊文思蓝渗出量显著增加（P<0.05），上述紧密连接蛋白表达量显著减少（P<0.05）；
　　④结果表明，人脐带间充质细胞来源外泌体通过下调内皮素1表达来保护血脊髓屏障的通透性，起到了修复脊髓损伤的作用。