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观察穴位埋线对哮喘大鼠动物模型肺组织p38 MAPK通路、白细胞介素4、Y-干扰素和Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响

  • 分类:学术讲座
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  • 发布时间:2023-05-11 16:03
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【概要描述】选取雄性Wistar大鼠40只,采用随机数字表法分为4组,每组10只:空白对照组不进行任何处理;哮喘模型组、地塞米松组与穴位   埋线组第1,8天腹腔注射卵蛋白和氢氧化铝混悬液制备哮喘模型,第15天起雾化吸入卵蛋白溶液诱发气道炎症反应症状,1次/d,连续2周

观察穴位埋线对哮喘大鼠动物模型肺组织p38 MAPK通路、白细胞介素4、Y-干扰素和Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响

【概要描述】选取雄性Wistar大鼠40只,采用随机数字表法分为4组,每组10只:空白对照组不进行任何处理;哮喘模型组、地塞米松组与穴位
  埋线组第1,8天腹腔注射卵蛋白和氢氧化铝混悬液制备哮喘模型,第15天起雾化吸入卵蛋白溶液诱发气道炎症反应症状,1次/d,连续2周

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  摘要
  哮喘大鼠模型,模型大鼠,动物模型,动物实验,建立哮喘动物模型
  支气管哮喘(简称哮喘)是一种临床常见的慢性呼吸道炎症反应性疾病,近年来随着环境的恶化,哮喘的发病率和忠病率均显著增加,据现有数据预测,到2025年哮喘忠者人数将再增加1亿。哮喘以广泛的气流阻塞引起患者出现反复呼吸困难、喘息气急等症状,其机制主要与炎症细胞、结构细胞(包括上皮细胞)和细胞因子等参与的气道炎症反应相关。嗜酸性粒细胞是哮喘发生的主要炎症细胞,嗜酸性粒细胞在呼吸道周围聚集浸润可诱发哮喘的气道炎症反应5。同时,Ⅱ型肺泡上皮细胞作为呼吸系统上皮的主要成分之一,可以通过其表面受体和分泌细胞因子等与免疫细胞相互作用,从而维持肺功能平衡、参与哮喘气道炎症反应
  有研究表明,呼吸系统上皮细胞的功能受Th1和Th2细胞因子的调节,Th2型细胞因子白细胞介素4和Th1型细胞因子v-干扰素等可以调节Ⅱ型肺泡上皮细胞在肺部炎症和免疫反应中的作用   。白细胞介素4可以破坏肺泡上皮的屏障功能和Ⅱ型肺泡上皮细胞的自我修复,还可诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞分泌嗜酸性粒细胞趋化因子3(CCL26)等促进嗜酸性粒细胞向炎症组织的迁移,这两种情况都可能加剧气道炎症反应;而v-干扰素可以抑制Th2型细胞因子白细胞介素4等在肺泡上皮细胞中的破坏作用,从而修复屏障功能、缓解气道炎症反应  。
  课题组前期研究发现,穴位埋线可以缓解哮喘大鼠气道炎症反应,其作用可能是通过调节p38 MAPK信号通路影响血清及肺组织中白细胞介素4和Y-干扰素的水平来实现的。Ⅱ型肺泡上皮细胞是肺组织的主要成分之一,推测Ⅱ型肺泡上皮细胞的功能受到组织中白细胞介素4和Y-干扰素含量的影响,故此次实验取哮喘大鼠的肺组织进行蛋白和基因检测。然而,穴位埋线缓解哮喘的气道炎症反应是否与Ⅱ型肺泡上皮细胞相关?是否同时受到p38 MAPK信号通路中白细胞介素4和y-干扰素表达水平的影响?基于此,实验在前期研究的基础上,通过观察p38 MAPK通路中白细胞介素4和y-干扰素表达的变化对哮喘大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响,进一步探讨穴位埋线缓解哮喘气道炎症反应的作用机制。
  背景
  课题组前期研究发现,穴位埋线缓解哮喘气道炎症与调节p38 MAPK通路中Th1/Th2的失衡相关,上述过程是否同时受到Ⅱ型肺泡上
  皮细胞功能状态的影响有待进一步研究。
  目的
  观察穴位埋线对哮喘大鼠肺组织p38 MAPK通路、白细胞介素4、Y-干扰素和Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响。
  方法
  选取雄性Wistar大鼠40只,采用随机数字表法分为4组,每组10只:空白对照组不进行任何处理;哮喘模型组、地塞米松组与穴位
  埋线组第1,8天腹腔注射卵蛋白和氢氧化铝混悬液制备哮喘模型,第15天起雾化吸入卵蛋白溶液诱发气道炎症反应症状,1次/d,连续2周;同时,地塞米松组15d后腹腔注射地塞米松治疗,1次/d,连续2周;穴位埋线组15d后在“肺俞、定喘和膻中”穴位给予埋线治疗。雾化吸入结束后,采用瑞氏-姬姆萨染色计数肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的相对含量,透射电镜观察肺组织中Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构的变化,免疫组化法检测肺组织中白细胞介素4和y-干扰素的阳性表达,Western Blot和PCR检测肺组织中p-p38 MAPK、白细胞介素4和y-干扰素的蛋白和基因表达。
  结论
  ①与哮喘模型组比较,地塞米松组与穴位埋线组肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的相对含量降低(P<0.01);穴位埋线组肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的相对含量高于地塞米松组(P<0.05);
  ②透射电镜下可见,与哮喘模型组比较,地塞米松组和穴位埋线组Ⅱ型肺泡上皮细胞中板层小体和线粒体受损情况缓解;
  ③免疫组化检测显示,与哮喘模型组比较,地塞米松组和穴位埋线组肺组织白细胞介素4表达降低(P<0.01),γ-干扰素表达升高(P<0.01);与地塞米松组比较,穴位埋线组肺组织白细胞介素4表达升高(P<0.01),y-干扰素表达降低(P<0.01);
  ④Western Blot和PCR检测显示,与哮喘模型组比较,地塞米松组和穴位埋线组肺组织p-p38 MAPK、白细胞介素4的蛋白和mRNA表达降低(P<0.01,P<0.05),v-干扰素的蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);
  ⑤结果表明,穴位埋线可能通过抑制p38 MAPK信号通路来上调v-干扰素和下调白细胞介素4的表达,减轻Ⅱ型肺泡上皮细胞的应激受损,缓解哮喘的气道炎症反应。

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