摘要
　　肺纤维化模型,动物模型,大鼠模型,模型大鼠,动物实验造模
　　特发性肺纤维化  （idiopathic pulmonary fibrosis，IPF） 是一种以逐渐加重的呼吸困难和肺功能不可逆性下降为特征的慢性、进行性、致命性的纤维化间质性肺疾病。西医治疗药物尼达尼布、吡啡尼酮虽然能够延缓 IPF 疾病进展、改善肺功能指数，但无法改变IPF患者的生存率。
　　本项目组受到中医络病理论启发，提出IPF核心病机在于“肺虚络瘀”，采用补虚通络法、通补络脉法、益气养阴活血通络法进行辨治，应用益气养阴活血通络方进行干预。前期临床试验证实，补虚通络疗法可有效改善IPF患者肺功能指数，在延缓IPF急性加重方面疗效明确。动物实验证实，益气养阴活血通络方可有效减轻IPF大鼠的肺组织炎症程度和纤维化程度，降低肺组织羟脯氨酸(HYP)含量以减少细胞外基质沉积。
　　目前，血小板活化在IPF发病过程中的重要作用越来越受到重视，成为早期干预IPF的研究焦点，但具体机制尚不清楚。研究发现，CD40-CD40L系统是成纤维细胞和其他结构细胞的重要活化剂，属于肿瘤坏死因子超家族成员共刺激分子，当血小板被二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶等激活后表达于活化的血小板膜表面，在肺部急性炎症、肺纤维化过程中发挥关键作用。
　　因此，本研究从血小板活化和CD40-CD40L系统方面探讨益气养阴活血通络方治疗IPF的潜在作用机制，为临床推广应用提供参考
　　目的
　　基于CD40-CD40L系统探讨益气养阴活血通络方治疗特发性肺纤维化(IPF)的可能作用机制。
　　方法
　　96只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组、益气养阴活血通络组，每组24只。除空白组外，其余各组大鼠采用气管内注射盐酸博来霉素制备IPF大鼠动物模型。造模次日吡非尼酮组采用吡非尼酮胶囊序贯方式灌胃，第1～7天给药剂量62.5mg/(kg·d),第8～14天给药剂量125mg/(kg·d),第15～28天给药剂量187.5mg/(kg·d);益气养阴活血通络组给予益气养阴活血通络方颗粒剂18g/(kg·d)灌胃；空白组和模型组每日给予10ml/kg生理盐水灌胃。各组大鼠均每日灌胃1次，连续28天。分别于模型制备次日起第7、14、28天(各组每个时间点8只大鼠)时采用HE染色观察各组大鼠肺脏组织病理形态学变化；碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量；酶联免疫吸附试验检测血清纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)、凝血因子IX(FIX)、凝血因子VI(FVI)、血小板因子4(PF-4)表达水平；流式细胞术检测血小板CD41、CD62P表达水平；蛋白免疫印迹法检测肺脏组织CD40、CD40L蛋白水平。
　　结果
　　空白组大鼠肺组织病理HE染色显示正常。模型组大鼠病理显示第7天时肺泡间隔增宽、腔内炎症细胞聚集，肺间质可见明显水肿；第14天时肺间质内可见胶原纤维增生；第28天时肺泡逐渐萎缩，胶原纤维大量沉积。与空白组同时间点比较，模型组大鼠第7、14、28天肺组织HYP含量，血小板CD41、CD62P表达水平，血清PAI、FIX、FVⅡ、PF-4表达水平，肺组织CD40、CD40L蛋白水平均显著升高(P<0.01)。与模型组同时间点比较，吡非尼酮组和益气养阴活血通络组大鼠肺组织病理形态学显示炎症细胞浸润明显改善、纤维化程度显著减轻。各给药组大鼠第7、14、28天肺组织HYP含量，血小板CD41表达水平，血清PAI、FIX、FVI、PF-4表达水平，肺组织CD40、CD40L蛋白水平均有不同程度下降(P<0.05或P<0.01)。与吡非尼酮组比较，益气养阴活血通络组大鼠第7d、14d、28d肺组织HYP含量及血清PAI、FIX、FVI、PF-4表达水平均下降，第7、28天血小板CD41、CD62P表达水平下降，第28天肺组织CD40蛋白水平下降(P<0.05或P<0.01)。

　　结论
　　益气养阴活血通络方治疗IPF机制可能与抑制血小板活化和CD40-CD40L系统从而改善肺纤维化病理损伤有关。