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RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)到底怎样才能养好它呢?它太容易分化了!

  • 分类:知识学堂
  • 作者:【如需咨询购买细胞或技术服务,请点击24小时客服咨询或留言哦】
  • 来源:
  • 发布时间:2021-12-09 11:04
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【概要描述】养好RAW 264.7的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。

RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)到底怎样才能养好它呢?它太容易分化了!

【概要描述】养好RAW 264.7的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。

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  养过RAW 264.7的小伙伴,
  都容易为一个问题感到苦恼:
  它太容易分化了!
  到底怎样才能养好它呢?
  今天就给大家分享一些心得。
  养好RAW 264.7之基础篇
  养好RAW 264.7的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。
  细胞名称
  RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
  细胞别称
  RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
  种属
  小鼠(雄性,成年BALB/c鼠)
  组织来源
  Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤
  生长特性
  贴壁细胞
  细胞形态
  不规则形(圆形、短梭形)
  生长培养基
  DMEM+10% FBS+1% P/S
  培养环境
  气相:95%空气;5%CO2  温度:37℃
  推荐传代比例
  1:3 - 1:6
  冻存液配方
  55% DMEM 40% FBS 5% DMSO
  
  ▲RAW 264.7生长图片
  养好RAW 264.7之进阶篇1
  除了基础条件,其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”,比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题,来一 一为大家解答。
  问题1 :收货后,细胞不见了
  总是会收到这类反馈:收到细胞,期待值满满地打开包装,但在显微镜下却找不到细胞!
  这是因为RAW 264.7 细胞贴壁较松,快递运输路上受到颠簸,可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。
  这时候不用担心,把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。
  如果静置后看到的细胞仍偏少,请将瓶子里的培养基都转移到离心管里,1200rpm(约250g)离心3分钟,即可看到沉淀的细胞。
  细胞全部脱落,慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法。
  问题2 :收货处理后,细胞不贴壁
  将细胞离心收集,用新鲜的培养基重悬细胞放到新的培养瓶里之后,可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。
  这种情况下,把细胞离心收集,用1mL培养基重悬,慢慢地,轻轻地吹打,直到细胞被吹成单细胞,就可以重新铺板了。
  RAW 264.7脱落后倾向于抱团,抱团时细胞是活着的,但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞,不然细胞很难重新贴壁。
  养好RAW 264.7之进阶篇2
  正确的传代方法是养好RAW 264.7的关键,每一步操作都要细致入微,稍有不慎细胞就分化了。
  RAW 264.7不能用胰酶消化,许多实验室用细胞刮传代,这是一种非常经典好用的方法。
  在养RAW 264.7细胞这十几年里,摸索出一个更不错的方法:吹打传代。
  吹打传代操作简单,对养细胞的萌新们更友好,也能更好地控制细胞分化率。
  吹打传代步骤
  01 轻拍几下培养皿
  02 用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来(吹不下来的舍弃)
  03 细胞吹下来后转移到15ml离心管
  04 1200rpm(约250g) 离心3min
  05 去上清,用新鲜培养基重悬细胞
  06 按比例接种到新的培养皿中

  吹打传代时机
  01 吹打传代时机
  02 当细胞密度较低的时候,可能不太好吹下来。
  03 当细胞密度达到80%~90%的时候,最容易吹下。
  
  ▲推荐传代的密度
  养好RAW 264.7之终结篇
  讲了那么多如何处理RAW 264.7分化的情况,那分化了的细胞到底是什么形态呢?
  
  分化的RA264.7
  分化的细胞呈多角形,体积明显增大,时常有较长的黑色触角。
  注意事项
  1 RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好;
  2 分化的细胞贴壁牢固,传代的时候请勿强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞;
  3 吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;
  4 细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关,有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况,连分化细胞都贴壁较松,此时更适宜用巴氏管吹打;
  5 培养时,无法保证100% 不分化,通过传代可以将分化比例控制在一定范围;
  6 RAW 264.7分裂活跃,记得每天看一看,周末也要抽点时间关心一下它哦~
  养细胞不易,每个细胞对我们而言,都像是宝宝,含在嘴里怕化了,捧在手里怕摔了。
  正是因为对科研的无畏坚持,让我们更有力量接受考验,因为科研本身,值得敬畏和付出。
  
  RAW 264.7的起源
  加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。
  他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。
  RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒),对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。

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