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细胞培养中的污染及可能的原因有哪些?要如何避免呢?一起来看这个总结

  • 分类:知识学堂
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  • 来源:专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)
  • 发布时间:2021-12-20 10:42
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【概要描述】细胞一旦遭到污染, 所有的实验结果都会变得毫无意义。因此, 及时检测并鉴定出所培养的细胞是否被污染至关重要,所以吉妮欧总结了以下内容,和大家一起分享讨论

细胞培养中的污染及可能的原因有哪些?要如何避免呢?一起来看这个总结

【概要描述】细胞一旦遭到污染, 所有的实验结果都会变得毫无意义。因此, 及时检测并鉴定出所培养的细胞是否被污染至关重要,所以吉妮欧总结了以下内容,和大家一起分享讨论

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  如何保持无菌,是每个细胞(人源细胞鼠源细胞及其它细胞)培养实验室一直面对的难题。污染几率增加的主要原因包括:操作技术不严格,试剂质量不达标,大气中孢子计数增加,培养箱或操作台使用和维护不当,污染了的冰箱和水浴锅。因此,在细胞培养过程中,操作者不仅要严格遵守标准的操作程序,同时还要特别注意新产品、新品牌、以及设备的清洁维护。
  细胞作为重要的实验模型广泛应用于各类生物实验, 几乎所有科研实验室中都需进行细胞培养。细胞培养过程中最大的威胁就是细胞污染, 凡是混入细胞培养环境中, 对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。细胞一旦遭到污染, 所有的实验结果都会变得毫无意义。因此, 及时检测并鉴定出所培养的细胞是否被污染至关重要,所以吉妮欧总结了以下内容,和大家一起分享讨论。
  常见的污染如下:
  1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。
  仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!
  可在培养液中加相应的抗生素处理。
  2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差。
  用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
  CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。
  其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。
  预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作。
  3、支原体:黑色的,多为多形,培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。
  用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。victoryx公司的使用时用50ug/ml DMEM培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
  4、黑胶虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。
  5、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
  6、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。
  污染的可能原因:
  可能原因很多,比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等。
  关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37℃试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。
  也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。
  如何避免污染:
  1、孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水;
  2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素;
  3、超净台的风机不能过大,风机到6-8格,否则也可能能致霉菌污染;
  4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作。

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