疾病相关基因稳转株构建

服务概述

　　稳转株是指通过基因编辑获得稳定过表达或抑制特定基因的细胞株。将疾病相关基因序列或抑制目的基因的shRNA序列装载至重组载体，通过慢病毒筛选系统或转座子筛选系统将目的基因的序列整合至宿主细胞的染色体中，实现目的基因持续、稳定的表达与调控。包括过表达稳转株、敲低稳转株和适应症疾病基因稳转株。

服务内容

　　采用慢病毒药筛系统“慢病毒感染——药物筛选法”or通过转座子筛选系统进行稳转细胞株的构建，包括构建过表达稳转株、敲低稳转株或疾病相关基因稳转株。

服务流程

　　一、慢病毒筛选系统
　　1、目的基因筛选
　　生信筛选目的基因或选择适应症的靶点基因；
　　2、细胞株选择
　　细胞株类型尽量选择和所研究的适应症一致，例如研究的适应症为肝癌，可选择相应的肝癌细胞系进行稳转株构建，这样构建的稳转株细胞也可以用于下游的体内抗肿瘤活性评价实验。通过QPCR和WB检测细胞系基因表达，根据细胞系中基因表达情况，选择需要构建稳转目的基因的细胞株。
　　另外，如果做药物与靶点之间的相互作用关系，可以选择293T和CHO-K1这一类比较常用的工具细胞，这类细胞容易被慢病毒感染，因此容易获得稳转细胞，节省时间成本。
　　3、构建载体
　　将目的基因CDs区序列或抑制目的基因的shRNA序列装载至重组载体；
　　4、慢病毒包装质粒提取
　　5、病毒包装
　　慢病毒质粒共转到293T细胞中，通过慢病毒包装系统进行病毒包装；
　　6、病毒感染
　　设置不同梯度MOI，筛选最佳MOI；
　　7、抗性筛选
　　常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遗传霉素(Geneticin)?，针对序列不同抗性选择不同的抗生素对细胞进行药物筛选；
　　8、构建多克隆/单克隆稳转株；
　　9、稳转株表达验证
　　10、交付实物
　　T25细胞瓶或冻存管，1到2*10^6个cells。
慢病毒筛选示意图
　　二、转座子筛选系统
　　1、目的基因筛选
　　生信筛选目的基因或选择适应症的靶点基因；
　　2、构建载体与质粒提取
　　3、转座酶质粒和转座序列质粒共转
　　转座酶质粒和转座序列质粒共转细胞；
　　4、抗生素筛选
　　常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遗传霉素(Geneticin)?，针对序列不同抗性选择不同的抗生素进行药物筛选；
　　5、单克隆
　　单克隆化扩增培养细胞；
　　6、检测目的基因序列是否转座进基因组
转座子筛选示意图

服务优势

　　1、一站式服务
　　我司细胞库有800株以上细胞株，资源种子齐全。提供产品全流程服务，省事省心；
　　2、技术成熟
　　通过“慢病毒感染——药物筛选法”构建成功的稳转株达500株以上，传代后稳定表达；通过转座子系统构建成功的稳转株已用于多个层面研究；
　　3、多种稳转株筛选系统可供选择；
　　4、时间保证
　　从质粒构建到多克隆稳转株交付，3-4个月；从质粒构建到单克隆稳转株交付，4-6个月；
　　5、质量保障
　　保证细胞株无支原体衣原体感染；
　　6、提供专业技术指导
　　技术团队平均技龄6年以上，提供专业培养技术指导；
　　7、售后无忧
　　2周无责售后，无后顾之忧。

代表案例

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